新葡萄8883官网AMG提供了一款有效的hPSC诱导分化内耳类器官试剂盒(产品编码:abs90132-1kit),此试剂盒用于生成内耳类器官。以下是该试剂盒的详细组成及实验准备。
一、实验准备
1. 试剂盒产品组成
- 培养阶段:
- EB诱导阶段:
- IE01EB形成培养基:30mL,保存于-20℃,可存放12个月。
- IE01-A补充剂A:40μL,保存于-20℃,可存放6个月。
- EB分化阶段:
- IE02基础培养基:120mL,保存于-20℃,可存放12个月。
- IE02-B补充剂B:250μL,保存于-20℃,可存放6个月。
- IE02-C补充剂C:70μL,保存于-20℃,可存放6个月。
- IE02-D补充剂D:50μL,保存于-20℃,可存放6个月。
- 耳泡形成阶段:
- IE03基础培养基:250mL,保存于-20℃,可存放12个月。
- IE03-E补充剂E:12mL,保存于-20℃,可存放6个月。
- 内耳类器官成熟阶段:
- IE04成熟培养基:200mL,保存于-20℃,可存放12个月。
- 类器官成熟阶段Matrigel:500μL,保存于-20℃,可存放6个月。
2. 辅助试剂
以下为实验中所需辅助试剂:
- PBS(货号:abs962):500mL,储存于2-8℃或室温,有效期12个月。
- Advance人多能干细胞培养基(货号:abs9404):100mL,储存于-20℃,有效期2年。
- 人多能干细胞消化液(货号:abs9409):100mL,储存于-20℃,有效期2年。
3. 实验耗材
所需耗材包括:
- 标准透明6孔细胞培养板(货号:abs7033):1箱,室温,保质期3年。
- 标准透明12孔细胞培养板(货号:abs7034):1箱,室温,保质期3年。
- 标准透明24孔细胞培养板(货号:abs7035):1箱,室温,保质期3年。
- 15mL离心管(货号:abs7119):1箱,室温,保质期3年。
- 50mL离心管(货号:abs7121):1箱,室温,保质期3年。
- 10mL一次性移液管(货号:abs7053):1箱,室温,保质期3年。
- 200μL吸头(盒装,无菌无酶,货号:abs7075):1箱,室温,保质期3年。
二、诱导流程概述
本实验涉及如下主要步骤:
1. EB形成(2天)
首先在基质胶包被的六孔板中培养hPSC,随后进行消化和EB形成培养基的制备。最终将形成的细胞悬液接种于96孔板中,注意控制培养条件。
2. EB分化阶段(12天)
在此阶段,通过补充各种基质和添加剂,促进EB的分化和发育。培养条件需保持稳定,以确保培养效果。
3. 耳泡形成阶段(6天)
在EB诱导结束后,准备培养基并转移细胞以诱导耳泡的形成。整个过程要注意培养基的更换和温度条件。
4. 内耳类器官成熟阶段(42天)
该阶段为培养类器官,需更换成熟培养基,定期更换培养基以维持细胞的健康生长,最终观察成熟的内耳类器官。
三、内耳类器官鉴定
根据实验要求,鉴定内耳类器官的成熟状态及功能。为确保标准化操作,推荐使用新葡萄8883官网AMG的相关试剂盒,确保实验成功的实现。
总之,新葡萄8883官网AMG提供了完善的试剂和耗材,全方位支持内耳类器官的研究与应用,助力生物医药领域的创新发展。