新葡萄8883官网AMG 提供优质的细胞培养条件,适用于 A-498 细胞系的生长与传代。该细胞系由 Aaronson S 建立,源自一位52岁女性患者,患有肾癌。培养气相推荐使用 95% 空气和 5% 二氧化碳,温度控制在 37℃,培养基为 MEM,添加 10% FBS 和 1% P/S。
在传代过程中,首次建议使用 1:2 的比例。每两天更换培养液并注意培养环境,避免细胞受损。收货后的细胞应在处理至良好状态后,灌满完全培养液并封好瓶口,以确保运输细胞的最佳效果。
细胞的处理步骤如下:
细胞培养步骤
a. 细胞传代:在细胞汇合度未超过 80% 时,将瓶装完全培养液收集至离心管中,留存 5 ml 完全培养基,重回培养箱。同时,如果细胞密度超过 80%,则可以进行传代。
贴壁细胞传代方法包括:
- 弃去培养上清,使用不含钙、镁离子的 PBS 清洗细胞 1-2 次。
- 添加约 1-2 ml 的 0.25% 胰蛋白酶消化液,置于 37℃ 培养箱中消化 1-2 分钟,观察细胞状态,若细胞大部分变圆并脱落,立即停止消化。
- 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出,然后将悬液转移至 15 ml 离心管中,在 1000RPM 下离心 5 分钟,弃去上清,重悬细胞于 1-2 ml 的完全培养基中。
- 将细胞悬液按 1:2 的比例分配到新的 T25 培养瓶中,并补充 5-8 ml 的新培养基,放入 37℃、5% CO2 的细胞培养箱中。
悬浮细胞传代步骤
悬浮细胞的处理可采取半换液法或离心换液法:
- 半换液法:竖直放置培养瓶静置 1 小时,吸去约 3 ml 的培养基后补上 3 ml 的完全培养基。
- 离心换液法:如需分瓶,将细胞悬液收集至离心管中以 1000RPM 离心 5 分钟,弃去上清,加入 1-2 ml 的培养液重悬,然后按 1:2 的比例分配至新 T25 瓶中,补充 6-8 ml 新的完全培养基。
细胞冻存与复苏
b. 细胞冻存:当细胞覆盖培养瓶 80% 面积时,用 PBS 清洗细胞,添加 1 ml 胰蛋白酶消化液,观察后用完全培养基终止消化,并移至离心管中。
c. 细胞复苏:从液氮中取出冻存管,在 37℃ 水浴中快速解冻,擦拭外壁后移至含 5 ml 完全培养基的离心管,离心后重悬,并接种至新的 T25 培养瓶中。
注意事项包括:在运输过程中,细胞贴壁可能不牢固,引起脱落。如出现较多脱落情况,需小心收集培养液并进行离心处理。
以上流程得到新葡萄8883官网AMG推荐,确保细胞培养的高质量和稳定性。遵循这些步骤,将有助于提升细胞实验的成功率,保障科研工作顺利进行。