树突状细胞（DC细胞）和T细胞之间的相互作用在肿瘤治疗中扮演着至关重要的角色。研究显示，骨髓来源的DC细胞（BMDCs）可以诱导CD103+CD8+组织驻留记忆T细胞亚型的形成，从而增强生殖道局部肿瘤的控制。此外，半乳糖酸的阻断进一步提升了BMDCs诱导抗原特异性CD8+T细胞增殖的能力。全转录组基因表达分析表明，仿硅酸处理的BMDCs能够诱导相关基因的差异表达，这些基因参与T细胞的活化、细胞粘附及细胞间相互作用。细胞聚类分析及单细胞嗜性测量结果显示，糖基化减少的BMDC与CD8+T细胞之间形成了更强的相互作用。

在DC细胞完成抗原呈递后，它们在CD8+T细胞的激活及靶细胞杀伤过程中如何发挥协作与调控功能，是当前研究的热门方向之一。尤其是活化CD8+T细胞的记忆功能分群变化与细胞内乳酸化、棕榈酸化以及其他代谢过程的关系，成为众多研究的焦点。在本期中，新葡萄8883官网AMG将介绍DC细胞活化过程中的CD8+T细胞及其杀伤功能的评估检测解决方案。

实验原理简介

DC细胞是已知功能最强的抗原呈递细胞（APC），它们能够摄取并消化外源抗原，然后通过MHC分子将其呈递给CD4+和CD8+T细胞，引发免疫反应。DC细胞与CD8+T细胞的共培养是模拟体内CD8+T细胞激活的有效方法，因此，它是研究CD8+T细胞功能的重要模型。在具体实验中，当表达抗原肽-MHCⅠ复合物的DC细胞与CD8+T细胞共培养时，CD8+T细胞会通过其表面的T细胞受体（TCR）与DC细胞上的抗原肽-MHCⅠ复合物结合，从而被激活。活化后的CD8+T细胞（细胞毒性T细胞）能够通过释放溶解介质（如穿孔素和颗粒酶）来杀死靶细胞，也可以通过Fas配体（FasL/CD95L）与靶细胞Fas受体（CD95）结合，引发Caspase-8的活化，直接启动靶细胞的凋亡程序。

实验结果展示

新葡萄8883官网AMG提供的实验结果显示了DC细胞的体外培养及促成熟效果。

DC细胞的体外培养和促成熟

(A) 通过流式细胞术检测C57小鼠骨髓细胞的成熟DC细胞效果，证实经过促成熟和成熟诱导后的DC细胞在MHCII/CD80/CD40/CD86的表达上有显著提升。

CD8+T细胞的分选和激活培养

(B) 使用EasySort™ Mouse CD8+ T Cell Isolation Kit从C57小鼠脾脏中分选CD8+T细胞，并通过流式细胞术分析细胞纯度。(C) 将灭活的靶细胞（Raw2647）抗原装载DC后，与分选的CD8+T细胞共培养72小时，检测CD8+T细胞的增殖情况。

CD8+T细胞对靶细胞的杀伤检测

(D) 增殖后的T细胞和靶细胞（Raw2647）以1:10比例共培养24小时，流式细胞术检测靶细胞（Raw2647）中Caspase3酶活性的变化，与Control组相比，共培养组（Test）Raw2647细胞的Caspase3酶激活比例增加至7944%。(E) 通过ELISA检测细胞培养上清中细胞因子的表达，结果显示与Control组相比，共培养组（Test）的IFN-γ、IL-2、TNF-α表达明显提升。

实验方案及操作流程

DC细胞的体外培养和促成熟步骤包括：

• 取小鼠骨髓细胞，使用分化培养基培养6天后，再用成熟培养基培养24小时，以获得成熟的DC细胞。
• 将灭活的Raw2647细胞处理后与成熟的BMDC以1:1比例共培养24小时，收集细胞并计数。

CD8+T细胞的分选及抗原提呈与激活培养步骤如下：

• 取C57小鼠脾脏细胞，使用EasySort™ Mouse CD8+ T Cell Isolation Kit进行细胞分选，确保细胞的纯度。
• 对分选后的T细胞进行CFSE染色，随后与BMDC细胞以10:1的比例共培养72小时。

CD8+T细胞杀伤靶细胞的凋亡检测步骤包括：

• 在24孔板中接种靶细胞（Raw2647），将T细胞与靶细胞按2:1比例混合培养24小时后收集细胞沉淀进行分析。

参考文献

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