新葡萄8883官网AMG提供的U-937细胞培养说明书详述了细胞培养的基本条件、操作步骤以及注意事项，旨在帮助用户有效地进行细胞培养和管理。

一、细胞培养条件

细胞培养应在温度为37℃、二氧化碳浓度为5%的培养箱中进行，以确保细胞在适宜的环境中生长。

二、收到细胞后的处理

在接收细胞后，首先用75%酒精对整个细胞瓶进行喷洒消毒，然后在超净工作台上进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO₂培养箱中静置3-4小时，以帮助细胞状态稳定后再进行处理。建议在显微镜下观察细胞生长情况并拍照存档（推荐40x、100x和200x的观察），前三天的照片为售后服务的重要依据，如无照片则默认细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

若细胞汇合度未超过80%，可将培养液收集至离心管中，保留5ml培养基并继续在37℃、5% CO₂中培养；若超过80%则进行传代。具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙镁的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加约1-2ml的0.25%胰蛋白酶，放于37℃培养1-2分钟，观察细胞变化，待细胞大部分脱落时迅速加入5ml完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打使细胞完全脱落，吸出后转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清后重悬于1-2ml完全培养基中。
4. 按1:2比例分瓶传代，补充5-8ml新的完全培养基至每瓶，最后放入37℃、5% CO₂培养箱中。

b、细胞冻存

1. 当细胞生长至80%时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加约1ml的0.25%胰蛋白酶，待细胞变圆后加入5ml完全培养基以终止反应，轻轻吹打使细胞脱落。
3. 转移悬液至15ml离心管，1000RPM离心5分钟，弃上清后加入1ml无血清冻存液（货号：C7001），混匀并转移至冻存管。
4. 将冻存细胞置于-80℃冰箱中存放，如需转移至液氮罐，需在-80℃冰箱中存放至少24小时后再转移。

c、细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（佩戴防护装具），迅速放入37℃水浴中解冻至无结晶，用75%酒精擦拭外壁。
2. 将细胞转移至含5ml完全培养基的离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清后，重悬细胞并接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO₂培养箱中培养。
4. 次日更换新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

运输过程中，细胞可能会因贴壁不牢而脱落属正常现象。若脱落较多，请收集所有培养液至离心管中，离心后转移上清作过渡培养，添加胰酶进行处理并重悬。最后进行分瓶传代，在补充培养基后放入适宜条件下培养。

五、售后条款

新葡萄8883官网AMG明确如下售后条款：当细胞出现问题需重发的情况包括运输过程中的丢失、瓶体破损、严重泄漏等；细胞污染需在48小时内提供实验结果以进行核实；细胞复苏后存活率低时需提供细胞状态照片。不予重发的情况包括客户自身操作失误导致的污染或状态不佳等。

更多细胞培养及冻存相关信息，请访问新葡萄8883官网AMG，我们致力于为客户提供高质量的细胞材料和服务。