新葡萄8883官网AMG专注于提供细胞体外基因敲除解决方案，尤其是针对细胞基因敲除的定制服务。目前，我们推出了多种细分的敲除服务，欢迎您咨询新葡萄8883官网AMG团队，以获取详细的技术路线和成功案例资料。

新葡萄8883官网AMG提供真核细胞体外基因敲除的定制服务。该服务将定期更新Q&A，以便更好地满足客户需求。以下是最新的Q&A【2503版】：

1-20问：关于基因敲除定制服务的相关问题，请详见我们的服务指南和高通量基因敲除定制服务（RNP法）Q&A【2409版】。

21. 如何验证基因敲除是否成功？
22. 精准敲除和模糊敲除有何区别？

（1）精准敲除：采用同源重组（HDR，Homology-Directed Repair）机制，在目标基因中引入精确的修饰（如特定片段删除、点突变或插入），从而完全或部分失活基因功能。精准敲除的实验策略通常不同于一般的基因敲除，而通常提到的基因敲除则是指模糊敲除。新葡萄8883官网AMG提供精准敲除的定制服务，专注于靶基因指定区域的核苷酸序列进行敲除、敲入及突变。

（2）模糊敲除：通过非同源末端连接（NHEJ，Non-Homologous End Joining）机制，在目标基因的指定区域中随机引入插入或缺失（Indel）突变，导致基因编码框移位或提前终止密码子，从而破坏基因功能。

23. CRISPR/Cas9方法可以敲除的最大片段范围大约是多少？
理论上可以敲除1kb到1Mb范围的片段，结合多靶点切割技术或其他技术（如CRISPRa/i、表观遗传修饰），可以实现超大片段的敲除（1Mb）。

24. 如何提高原代细胞的编辑效率？
使用病毒载体、慢病毒/AAV整合至基因组内，电场诱导细胞膜穿孔，针对贴壁或悬浮的原代细胞（需优化参数），同时可以通过核转染直接将Cas9-RNP导入难以转染的细胞（如原代T细胞），或利用脂质纳米颗粒包裹Cas9-sgRNA复合物进行转染。

25. 如何提高基因敲除效率？
26. 如何分析基因敲除后的表型变化？
27. 如何区分纯合敲除与杂合敲除？
28. CRISPRRNP法适用的细胞及应用场景有哪些？

新葡萄8883官网AMG的CRISPR/Cas9 RNP基因编辑法，利用体外合成的single-guide RNA（sgRNA）与Cas9蛋白形成核糖核蛋白复合物（RNP），通过电转化或脂质体转染的方式将RNP高效送入细胞内。这样可以实现高效、稳定的遗传细胞池构建，无需依赖传统的慢病毒或质粒法，避免了外源序列的引入，最大限度地保持细胞的表型，降低脱靶效应，且有效避免病毒基因组的随机整合对后续实验的影响。新葡萄8883官网AMG将推动CRISPR/Cas9 RNP法的应用，全面取代传统基因敲除的方法。