细胞融合的方法有多种，其中常用的包括转动法和离心法。在进行细胞融合时，脾细胞和骨髓瘤细胞的比例通常为1:1至10:1不等，最常见的比例是3:1或5:1。

试剂与材料

1. 脾细胞和骨髓瘤细胞作为融合的供体。

2. 1640培养液100ml。

3. 完全1640液100ml。

4. 25% FCS－1640液50ml。

5. HAT培养液100ml。

6. 50% PEG：选择分子量为4000、高纯度的PEG（如日本进口或Serva），取10g置于25ml瓶中高压灭菌。使用前，加入预热至40℃的1640液10ml等量（W/V）混合，通过酚红检测pH，一般不需要调节。如有pH变化，可用HCl或NaHCO3进行调整。

7. 10ml和50ml的灭菌沉淀管或瓶。

8. 40孔塑料培养盘。

操作方法

1. 准备脾细胞。

2. 在50ml沉淀管中混合108个脾细胞和107个小鼠骨髓瘤细胞，并加入50ml的25% FCS－1640液。

3. 在室温下以400g离心3分钟，使细胞沉淀。

4. 移去上清液。

5. 轻敲沉淀管底部以使沉淀流动，随后将沉淀管放入40℃水浴中，以达到融合温度。

6. 加入预热至40℃的50% PEG 8ml，使用1ml吸管缓慢滴加，同时轻摇沉淀管，观察到颗粒的出现，整个滴加过程持续约2分钟。

7. 加入1ml 1640液，边加边轻摇，持续时间为1分钟。

8. 重复步骤7。

9. 再次加入1ml 1640液，边加边轻摇，持续时间为0.5分钟。

10. 重复步骤9。

11. 最后加入15ml 1640液。

12. 在室温下以400g离心1分钟，使细胞沉淀。

13. 移去上清，轻敲沉淀管底部，加入25ml含有HAT的完全1640液。

14. 向已经前一天培养过细胞的40孔塑料培养盘中每孔滴加融合的细胞液，每孔约1滴（约0.05ml）。

15. 轻轻摇动后，将其放入5% CO2饱和湿度的37℃培养箱中。

16. 在第3、6、9、10天更换含HAT的完全1640培养液，注意轻轻吸取上清液，确保不吸出固定在孔底的细胞，并根据需要加入适量的饲养细胞。

17. 在第12、15天继续更换含有HAT的完全1640培养液。在每次更换培养液之前，用倒置显微镜观察，通常约10天后可见杂交瘤细胞的生长。大多数杂交瘤细胞在10到20天内会出现，但也有一些在1个月左右才能显现。

18. 当杂交瘤细胞出现后，吸取上清液以检查抗体的产生。

19. 对持续生长的杂交瘤细胞进行增殖传代。在传代过程中，根据情况逐渐取消HAT液，用10% FCS－1640液替代。同时，进行液氮保存和克隆化操作。在每一代的过程中，都要进行抗体检查，以避免抗体细胞的变异和丢失。

在细胞融合过程中，结合新葡萄8883官网AMG的优质材料和标准化流程，可以显著提高实验的成功率，为生物医疗研究提供强有力的支持。