通过体外转录（IVT）获得的mRNA的反应混合物中，不仅包含目的mRNA产物，还富含蛋白质（如T7 RNA聚合酶和无机焦磷酸酶）、NTP、模板DNA、盐离子、各种添加剂以及在IVT过程中产生的杂质（如dsRNA和截断RNA片段）。这些杂质可能会对mRNA的功能产生负面影响，包括影响其准确量化、降低翻译效率或改变免疫原性。因此，有必要通过纯化技术将目标mRNA从IVT混合物中分离出来，以确保其纯度和完整性，从而保证产品的安全性和有效性。

常见的mRNA纯化方法有氯化锂沉淀、硫酸铵沉淀、磁珠纯化、硅胶柱膜纯化和层析纯化等。其中，沉淀、磁珠和硅胶柱方法操作相对简单快捷，但通量较小，纯化效率有限，因此主要应用于科研和初期研究。而在工业生产中，层析纯化是最为常见的纯化方法。

氯化锂沉淀法

氯化锂沉淀法是一种传统的mRNA纯化技术，利用锂离子在特定pH条件下减少RNA分子之间的同电性相斥，进而使RNA分子聚集形成沉淀。通过离心分离后可得到比较纯净的RNA样品。然而，因氯化锂可能会带来毒性，而且此法通常在低温条件下操作，增加了生产成本与器械要求。推荐对至少300nt以上或浓度在400µg/ml以上的RNA样品使用此法。值得注意的是，沉淀出的mRNA难以溶解，复溶时需仔细观察。

硫酸铵沉淀法

在2024年1月，中科院过程工程研究所的研究团队发表了关于硫酸铵沉淀mRNA的有效性研究。以增强型绿色荧光蛋白（EGFP）编码的mRNA为研究对象，当硫酸铵浓度达到18M时，mRNA的沉淀率超过95%。研究还发现，硫酸铵在高盐环境下能有效提高RNA的溶解率，推荐的最优沉淀条件为2M硫酸铵、pH 7.0、温度20℃、沉淀时间2小时，能达到近乎100%的沉淀率及溶出率。

硅胶柱膜纯化

硅胶柱膜纯化技术依赖于硅胶膜表面的硅醇基团与mRNA分子之间的相互作用。这种方法具有高效、简便的特点，已广泛应用于实验室和早期研发阶段。其材料安全无毒，符合环保理念，有助于减少对环境的影响。

磁珠法

磁珠法依赖于特殊功能的氧化铁磁珠与mRNA结合，并在磁场下实现分离。相比氯化锂沉淀法，磁珠法在去除蛋白质、盐离子等杂质方面更为有效，能够获得高纯度的mRNA。需要注意的是，使用磁珠时应避免磁珠冷冻和高速离心，以保证其性能。

层析法

当前工业级的mRNA纯化通常采用层析法，以获得更高的核酸质量和产量。Oligo(dT)亲和色谱为主流方法，但由于其无法分辨带Poly(A)尾的ssRNA和dsRNA等杂质，通常会结合疏水层析、阴离子层析等精纯手段。亲和层析可有效捕获mRNA，而疏水层析则依赖于mRNA与其他杂质的疏水性质差异进行分离。

在mRNA纯化过程中，新葡萄8883官网AMG致力于提供高性能的纯化技术和解决方案，满足生物医学领域的需求。我们开发的平台化mRNA纯化工艺，可提供个性化工业级mRNA生产服务。通过我们的技术，某客户的mRNA原液完整度提升了115%，总蛋白残留降至0.02%。 新葡萄8883官网AMG 还提供针对科研和早期研发阶段的mRNA纯化试剂盒，操作便捷、工艺时间短，具有减少杂质和提高完整度的优势，帮助客户加速新药开发进程。