新葡萄8883官网AMG致力于为生物医学研究提供高效的产品。本文将探讨破骨细胞的诱导分化机制及其实验方法，帮助研究人员在骨代谢领域取得更好的进展。

破骨细胞的概述及功能

破骨细胞是一种特殊的多核细胞，来源于造血干细胞分化而来的巨噬细胞，其主要功能是进行骨吸收。RANKL/RANK/OPG信号通路是调控破骨细胞分化的关键，能够精确调控破骨细胞与成骨细胞之间的活性平衡，从而维持骨骼的稳态。

RANKL、RANK和OPG信号通路

核因子κB受体激活因子配体（RANKL）被认为是促进破骨细胞成熟和功能活性的主要因子。M-CSF能够诱导破骨细胞前体在细胞膜上表达RANK，结合RANKL，从而诱导破骨细胞的分化。尽管体内破骨细胞数量较少，仅占分离细胞的0.8%-1.2%，但它们在体外分离培养的难度较大，通常采用诱导法来实现，常用的方法包括骨髓单核细胞诱导法和RAW264.7细胞系诱导法。

骨髓单核细胞诱导法

新葡萄8883官网AMG推荐的骨髓单核细胞诱导法如下：

1. 选用8-12周龄的雄性C57BL/6J小鼠，使用CO2吸入法处理后，将小鼠浸泡于75%乙醇中进行消毒。
2. 无菌操作下，完整取下小鼠后肢，去除多余的皮肤和肌肉，将骨头置于含有2%青霉素-链霉素的PBS溶液中。
3. 分离胫骨和股骨，清洗骨头两次，注意全程保持无菌操作。
4. 用注射器向骨头两端注入α-MEM，冲洗出骨髓细胞，并过滤到离心管中。
5. 进行离心、红细胞裂解，并重悬于含有M-CSF的培养基中培养。
6. 在培养期间每隔一天更换培养基，直至贴壁细胞达到80%-90%的融合。

RAW264.7细胞系诱导法

使用RAW264.7细胞系进行破骨细胞诱导，需遵循以下步骤：

1. 将细胞在含10%FBS的DMEM中常规培养，待细胞汇合度达到80%-90%时传代。
2. 制备细胞悬液后，以2x10⁴ cells/孔的密度接种于24孔板中。
3. 接种后12小时，加入RANKL以诱导细胞分化。
4. 每三天更换培养基，并补加RANKL。
5. 分化培养4天后可观察到多核破骨细胞的形成。

实验注意事项

进行破骨细胞诱导时，需注意以下事项：

• 确保细胞培养环境的无菌操作。
• 控制细胞接种的密度，避免细胞增殖过快影响后续诱导效果。
• 破骨细胞诱导成熟后，尽快进行TRAP染色，以保证细胞活性。

产品优势

新葡萄8883官网AMG提供高活性、高批间一致性的重组M-CSF和RANKL蛋白，助力稳定高效诱导破骨细胞。这些产品经过严格测定，能够确保最佳的细胞增殖和分化效果。

通过上述方法和注意事项，希望能为您的破骨细胞研究提供有效的指导与帮助。欲了解更多信息，请访问新葡萄8883官网AMG的官方网站。